MilliporeECL發光液比DAB顯色靈敏度高千倍以上✘•☁。在暗房內高丰度蛋白條帶的熒光常常數小時內仍然肉眼可見▩₪▩₪▩，X線膠片曝光5～30s即可得到高畫質晰條帶；低丰度蛋白條帶熒光肉眼可能不易察覺▩₪▩₪▩，但曝光30s~5min即可檢測條帶；極低丰度的蛋白條帶熒光可允許30min~12h曝光以檢測目的條帶✘•☁。MilliporeECL發光液衰減較慢▩₪▩₪▩，20min內熒光幾無減弱▩₪▩₪▩，檢測時產生的非特異背景非常低▩₪▩₪▩，也可節省抗體和待測樣品的用量
 

　　1.保鮮膜的質量✘•☁。a.國產的保鮮膜▩₪▩₪▩，很多廠家偷工減料打價格戰▩₪▩₪▩，造成保鮮膜很薄亦破損✘•☁。ECL滴加到保鮮膜上容易從肉眼不易分辯的小孔洩露▩₪▩₪▩，一方面ECL反應不充分▩₪▩₪▩，另一方面ECL所含液體會溶解試驗檯上殘留未知的化學藥品顆粒(也許你或其他人曾經不小心打翻過某種化合物)₪│₪◕、灰塵等等▩₪▩₪▩，造成熒光淬滅✘•☁。在簡述原理時▩₪▩₪▩，我曾經提到過很多化合物₪│₪◕、金屬離子能直接催化過氧化物水解▩₪▩₪▩，在極短的時間內消耗掉所有的HRP酶▩₪▩₪▩，熒光轉瞬即逝✘•☁。
 

　　b.保鮮膜的化工原料或拉制過程中▩₪▩₪▩，殘留未知的化學試劑▩₪▩₪▩，引起熒光淬滅；廉價的保鮮膜問題尤多✘•☁。
 

　　目前▩₪▩₪▩，國產的就“妙潔”比較過關▩₪▩₪▩，保鮮膜厚度和化學物殘留都不影響ECL顯影✘•☁。
 

　　如果買不到合格的保鮮膜▩₪▩₪▩，也可以用其他物品替代；但要特別注意這些支援物表面的乾淨▩₪▩₪▩，好不要有任何化學試劑殘留▩₪▩₪▩，包括風乾的TBST鹽結晶顆粒✘•☁。
 

　　2.ECL孵育結束後膜需要控幹✘•☁。中學物理學過水會吸收光譜▩₪▩₪▩，因此任何液體包括ECL溶液本身都會干擾熒光強度▩₪▩₪▩，所以ECL孵育結束時需要控幹✘•☁。一般夾起膜▩₪▩₪▩，讓膜的一角或一邊接觸吸水紙；但是請注意不能讓膜幹掉✘•☁。某些訊號較弱的ECL▩₪▩₪▩，膜幹掉後熒光會消失；較好的試劑盒▩₪▩₪▩，熒光相對穩定▩₪▩₪▩，但吸乾以後▩₪▩₪▩，背景熒光也會升高▩₪▩₪▩，而且會嚴重影響重新標記新抗體時的背景✘•☁。因此▩₪▩₪▩，按照我的方法▩₪▩₪▩，讓自由流下的多餘的ECL被吸走就好✘•☁。
 

　　3.控乾的膜要仔細用保鮮膜包被▩₪▩₪▩，防止接觸外界異物造成熒光淬滅；同時▩₪▩₪▩，包裹保鮮膜時要細心▩₪▩₪▩，儘量不讓正面保鮮膜和膜之間出現皺褶✘•☁。皺褶的地方會堆積多餘的ECL▩₪▩₪▩，要麼形成一條熒光的亮線；要麼由於液體吸收熒光或者區域性區域HRP過度消耗▩₪▩₪▩，呈線條狀淬滅✘•☁。
 

　　4.在膜放入壓片夾之前▩₪▩₪▩，好肉眼觀察一下熒光訊號的強弱▩₪▩₪▩，這有利於判斷實驗可能出現的問題✘•☁。很多人提問看見很強的熒光了▩₪▩₪▩，但怎麼壓片都沒有訊號▩₪▩₪▩，那麼就是快速淬滅(閃滅▩₪▩₪▩，再怎麼快速操作也拿不到這種情況下的熒光訊號)造成的；有這個觀察至少能夠判斷ECL孵育之前實驗操作應該問題不大▩₪▩₪▩，而問題主要是淬滅✘•☁。如果你省略這個步驟▩₪▩₪▩，那問題就非常複雜了▩₪▩₪▩，因為之前任何操作都可能導致白板▩₪▩₪▩，根本無法判斷✘•☁。