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影響MilliporeECL發光液使用的因素是什麼
瀏覽次數₪₪:317釋出日期₪₪:2022-10-27
  MilliporeECL發光液比DAB顯色靈敏度高千倍以上✘•☁。在暗房內高丰度蛋白條帶的熒光常常數小時內仍然肉眼可見▩₪▩₪▩,X線膠片曝光5~30s即可得到高畫質晰條帶;低丰度蛋白條帶熒光肉眼可能不易察覺▩₪▩₪▩,但曝光30s~5min即可檢測條帶;極低丰度的蛋白條帶熒光可允許30min~12h曝光以檢測目的條帶✘•☁。MilliporeECL發光液衰減較慢▩₪▩₪▩,20min內熒光幾無減弱▩₪▩₪▩,檢測時產生的非特異背景非常低▩₪▩₪▩,也可節省抗體和待測樣品的用量
 
  1.保鮮膜的質量✘•☁。a.國產的保鮮膜▩₪▩₪▩,很多廠家偷工減料打價格戰▩₪▩₪▩,造成保鮮膜很薄亦破損✘•☁。ECL滴加到保鮮膜上容易從肉眼不易分辯的小孔洩露▩₪▩₪▩,一方面ECL反應不充分▩₪▩₪▩,另一方面ECL所含液體會溶解試驗檯上殘留未知的化學藥品顆粒(也許你或其他人曾經不小心打翻過某種化合物)₪│₪◕、灰塵等等▩₪▩₪▩,造成熒光淬滅✘•☁。在簡述原理時▩₪▩₪▩,我曾經提到過很多化合物₪│₪◕、金屬離子能直接催化過氧化物水解▩₪▩₪▩,在極短的時間內消耗掉所有的HRP酶▩₪▩₪▩,熒光轉瞬即逝✘•☁。
 
  b.保鮮膜的化工原料或拉制過程中▩₪▩₪▩,殘留未知的化學試劑▩₪▩₪▩,引起熒光淬滅;廉價的保鮮膜問題尤多✘•☁。
 
  目前▩₪▩₪▩,國產的就“妙潔”比較過關▩₪▩₪▩,保鮮膜厚度和化學物殘留都不影響ECL顯影✘•☁。
 
  如果買不到合格的保鮮膜▩₪▩₪▩,也可以用其他物品替代;但要特別注意這些支援物表面的乾淨▩₪▩₪▩,好不要有任何化學試劑殘留▩₪▩₪▩,包括風乾的TBST鹽結晶顆粒✘•☁。
 
  2.ECL孵育結束後膜需要控幹✘•☁。中學物理學過水會吸收光譜▩₪▩₪▩,因此任何液體包括ECL溶液本身都會干擾熒光強度▩₪▩₪▩,所以ECL孵育結束時需要控幹✘•☁。一般夾起膜▩₪▩₪▩,讓膜的一角或一邊接觸吸水紙;但是請注意不能讓膜幹掉✘•☁。某些訊號較弱的ECL▩₪▩₪▩,膜幹掉後熒光會消失;較好的試劑盒▩₪▩₪▩,熒光相對穩定▩₪▩₪▩,但吸乾以後▩₪▩₪▩,背景熒光也會升高▩₪▩₪▩,而且會嚴重影響重新標記新抗體時的背景✘•☁。因此▩₪▩₪▩,按照我的方法▩₪▩₪▩,讓自由流下的多餘的ECL被吸走就好✘•☁。
 
  3.控乾的膜要仔細用保鮮膜包被▩₪▩₪▩,防止接觸外界異物造成熒光淬滅;同時▩₪▩₪▩,包裹保鮮膜時要細心▩₪▩₪▩,儘量不讓正面保鮮膜和膜之間出現皺褶✘•☁。皺褶的地方會堆積多餘的ECL▩₪▩₪▩,要麼形成一條熒光的亮線;要麼由於液體吸收熒光或者區域性區域HRP過度消耗▩₪▩₪▩,呈線條狀淬滅✘•☁。
 
  4.在膜放入壓片夾之前▩₪▩₪▩,好肉眼觀察一下熒光訊號的強弱▩₪▩₪▩,這有利於判斷實驗可能出現的問題✘•☁。很多人提問看見很強的熒光了▩₪▩₪▩,但怎麼壓片都沒有訊號▩₪▩₪▩,那麼就是快速淬滅(閃滅▩₪▩₪▩,再怎麼快速操作也拿不到這種情況下的熒光訊號)造成的;有這個觀察至少能夠判斷ECL孵育之前實驗操作應該問題不大▩₪▩₪▩,而問題主要是淬滅✘•☁。如果你省略這個步驟▩₪▩₪▩,那問題就非常複雜了▩₪▩₪▩,因為之前任何操作都可能導致白板▩₪▩₪▩,根本無法判斷✘•☁。
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