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PIERCE超敏型發光液使用方法簡單說說
瀏覽次數☁☁│:622釋出日期☁☁│:2022-06-22
  PIERCE超敏型發光液用於檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶(HRP)的抗體及其關聯的抗原↟☁▩。其原理是│▩,蛋白質或核酸在電泳後轉移到印跡膜上│▩,以一抗及HRP標記的二抗結合膜上的目的蛋白│▩,或以HRP標記的探針直接或間接結合膜上的核酸↟☁▩。洗膜後用本產品配製的ECL工作液│▩,室溫孵育膜數分鐘│▩,將印跡膜用保鮮膜包被貼上固定於X光片曝光暗盒↟☁▩。然後轉入暗室將X光膠片壓在膜上曝光數秒到數小時│▩,顯影定影后蛋白質或核酸條帶可清晰顯示在X光膠片上↟☁▩。
 
  採用*的發光底物系統│▩,降低曝光背景的同時引入新型的氧化劑│▩,大大提高試劑盒的穩定性│▩,使其在室溫能穩定放置一年↟☁▩。除用於X光片│▩,還可直接使用熒光CCD掃描│▩,主要用於WB檢測以及化學發光免疫檢測系統↟☁▩。
 
  PIERCE超敏型發光液使用方法:
 
  1.常規電泳│╃╃·、轉膜│╃╃·、HRP標記抗體或核酸探針孵育│╃╃·、洗膜↟☁▩。注意用HRP標記lgG或用一抗-鏈親和素-HRP夾法↟☁▩。核酸雜交膜用HRP標記探針雜交│▩,洗膜↟☁▩。
 
  2.洗滌膜上的HRP標記二抗時│▩,配製新鮮發光工作液☁☁│:分別取等體積的溶液A和B混合│▩,放置使之升到室溫否則會減弱熒光強度↟☁▩。建議立即使用工作液│▩,室溫放置數小時後仍可使用但靈敏度略有降低↟☁▩。
 
  3.用鑷子取出膜│▩,搭在濾紙上瀝乾洗液但勿使膜*乾燥↟☁▩。將膜*浸入並與發光工作液(0.125ml發光工作液/cm2膜)充分接觸↟☁▩。室溫孵育1分鐘│▩,準備立即壓片曝光↟☁▩。孵育時間過長不會增加靈敏度│▩,有時還會導致曝光條帶異常↟☁▩。發光過程的本質是酶促反應│▩,使用過少的發光工作液不利於反應進行│▩,也會導致膜上條帶曝光不均│▩,明顯降低靈敏度↟☁▩。為達節約目的可將膜剪小但勿降低發光液用量↟☁▩。
 
  4.用鑷子夾起膜│▩,搭在濾紙上瀝乾發光工作液↟☁▩。但勿洗去發光液↟☁▩。
 
  5.在X光膠片暗盒內面鋪一張面積大於膜的保鮮膜↟☁▩。將雜交膜貼在保鮮膜上│▩,將保鮮膜折起來*包裹雜交膜│▩,去除氣泡和皺褶│▩,可剪去邊緣部多餘的保鮮膜↟☁▩。用濾紙吸去多餘的發光工作液↟☁▩。用膠帶將覆蓋雜交膜的保鮮膜固定在暗盒內│▩,蛋白帶面向上↟☁▩。
 
  6.在黑暗中放入X光膠片│▩,分別曝光不同的時間如數秒到數分鐘↟☁▩。顯影沖洗↟☁▩。
 
  PIERCE超敏型發光液注意事項☁☁│:
 
  1.步驟1-5可在日光燈下操作;但發光液曝露於強光下時間過久靈敏度可能略有降低│▩,移到暗房操作可避免之↟☁▩。戴手套可以避免在膜上留下手印↟☁▩。
 
  2.長時間曝光或蛋白過量│▩,將加深背景並使條帶強弱變化失去線性關係↟☁▩。曝光不足則條帶模糊↟☁▩。
 
  3.發光工作液孵育約1分鐘後膜上的條帶發光↟☁▩。強條帶發光在暗房中肉眼可見│▩,低丰度蛋白條帶發光較弱甚至肉眼不可見但可使X光膠片曝光↟☁▩。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發光時間↟☁▩。肉眼不可見的熒光實際上可持續數小時並使X光膠片感光│▩,因而弱帶可曝光1-10小時↟☁▩。如果曝光後條帶不佳│▩,可用洗膜緩衝液洗膜│▩,重新孵育二抗│▩,然後重新用ECL發光和曝光↟☁▩。
 
  4.由於PIERCE超敏型發光液極其靈敏│▩,強烈推薦大多數進口抗體起始濃度為一抗1:1000-1:4000│▩,二抗1:2000-1:5000↟☁▩。抗體濃度過高將造成高背景或沒有條帶│▩,導致失敗!
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