PIERCE超敏型發光液用於檢測直接或間接標記辣根過氧化物酶(HRP)的抗體及其關聯的抗原↟☁▩。其原理是│▩，蛋白質或核酸在電泳後轉移到印跡膜上│▩，以一抗及HRP標記的二抗結合膜上的目的蛋白│▩，或以HRP標記的探針直接或間接結合膜上的核酸↟☁▩。洗膜後用本產品配製的ECL工作液│▩，室溫孵育膜數分鐘│▩，將印跡膜用保鮮膜包被貼上固定於X光片曝光暗盒↟☁▩。然後轉入暗室將X光膠片壓在膜上曝光數秒到數小時│▩，顯影定影后蛋白質或核酸條帶可清晰顯示在X光膠片上↟☁▩。
 

　　採用*的發光底物系統│▩，降低曝光背景的同時引入新型的氧化劑│▩，大大提高試劑盒的穩定性│▩，使其在室溫能穩定放置一年↟☁▩。除用於X光片│▩，還可直接使用熒光CCD掃描│▩，主要用於WB檢測以及化學發光免疫檢測系統↟☁▩。
 

　　PIERCE超敏型發光液使用方法:
 

　　1.常規電泳│╃╃·、轉膜│╃╃·、HRP標記抗體或核酸探針孵育│╃╃·、洗膜↟☁▩。注意用HRP標記lgG或用一抗-鏈親和素-HRP夾法↟☁▩。核酸雜交膜用HRP標記探針雜交│▩，洗膜↟☁▩。
 

　　2.洗滌膜上的HRP標記二抗時│▩，配製新鮮發光工作液☁☁│：分別取等體積的溶液A和B混合│▩，放置使之升到室溫否則會減弱熒光強度↟☁▩。建議立即使用工作液│▩，室溫放置數小時後仍可使用但靈敏度略有降低↟☁▩。
 

　　3.用鑷子取出膜│▩，搭在濾紙上瀝乾洗液但勿使膜*乾燥↟☁▩。將膜*浸入並與發光工作液(0.125ml發光工作液/cm2膜)充分接觸↟☁▩。室溫孵育1分鐘│▩，準備立即壓片曝光↟☁▩。孵育時間過長不會增加靈敏度│▩，有時還會導致曝光條帶異常↟☁▩。發光過程的本質是酶促反應│▩，使用過少的發光工作液不利於反應進行│▩，也會導致膜上條帶曝光不均│▩，明顯降低靈敏度↟☁▩。為達節約目的可將膜剪小但勿降低發光液用量↟☁▩。
 

　　4.用鑷子夾起膜│▩，搭在濾紙上瀝乾發光工作液↟☁▩。但勿洗去發光液↟☁▩。
 

　　5.在X光膠片暗盒內面鋪一張面積大於膜的保鮮膜↟☁▩。將雜交膜貼在保鮮膜上│▩，將保鮮膜折起來*包裹雜交膜│▩，去除氣泡和皺褶│▩，可剪去邊緣部多餘的保鮮膜↟☁▩。用濾紙吸去多餘的發光工作液↟☁▩。用膠帶將覆蓋雜交膜的保鮮膜固定在暗盒內│▩，蛋白帶面向上↟☁▩。
 

　　6.在黑暗中放入X光膠片│▩，分別曝光不同的時間如數秒到數分鐘↟☁▩。顯影沖洗↟☁▩。
 

　　PIERCE超敏型發光液注意事項☁☁│：
 

　　1.步驟1-5可在日光燈下操作；但發光液曝露於強光下時間過久靈敏度可能略有降低│▩，移到暗房操作可避免之↟☁▩。戴手套可以避免在膜上留下手印↟☁▩。
 

　　2.長時間曝光或蛋白過量│▩，將加深背景並使條帶強弱變化失去線性關係↟☁▩。曝光不足則條帶模糊↟☁▩。
 

　　3.發光工作液孵育約1分鐘後膜上的條帶發光↟☁▩。強條帶發光在暗房中肉眼可見│▩，低丰度蛋白條帶發光較弱甚至肉眼不可見但可使X光膠片曝光↟☁▩。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發光時間↟☁▩。肉眼不可見的熒光實際上可持續數小時並使X光膠片感光│▩，因而弱帶可曝光1-10小時↟☁▩。如果曝光後條帶不佳│▩，可用洗膜緩衝液洗膜│▩，重新孵育二抗│▩，然後重新用ECL發光和曝光↟☁▩。
 

　　4.由於PIERCE超敏型發光液極其靈敏│▩，強烈推薦大多數進口抗體起始濃度為一抗1:1000-1:4000│▩，二抗1:2000-1:5000↟☁▩。抗體濃度過高將造成高背景或沒有條帶│▩，導致失敗!